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ELISA間接法不能直接用酶標記的原因何在?

發(fā)布時間:2019-03-05   點擊次數(shù):1449次

在ELISA實驗中,用間接法測定抗體,不能直接將待測抗體直接用酶標記,然后直接加底物。而要加酶標抗抗體呢?


如果將酶標記到待測抗體上,相對經(jīng)典的間接法更加繁瑣,而且您在摸索標記條件時不能保證操作失誤導致待測抗體失活;酶標二抗現(xiàn)在是已經(jīng)商品化了的,被大規(guī)模生產(chǎn),購買后使用方便。如果你的間接做的好的話,方法被優(yōu)化了后,一抗二抗顯色,總共的時間加起來,出結(jié)果不會超過2-3小時。


可以用直接ELISA法,就是用抗體包板,在抗原上標記酶,然后顯色,這樣與間接法相比就減少了一步,縮短了時間。


但是,直接法和間接法,他們各有優(yōu)缺點,需要根據(jù)實驗具體要求而定。
1、待測抗體一般是免疫后產(chǎn)生的抗體,其中有免疫失敗和抗體過少等因素存在,用酶標記有許多不確定性,如用酶標記前期有測不出效價的可能,造成不必要的困惑。


2、ELISA酶聯(lián)免疫中酶標抗抗體和抗體結(jié)合后有巨大的信號放大作用,可以將信號擴大千倍以上,適合于較低抗體量的測定。


3、ELISA試劑盒SCI文章篩出單抗后可以考慮直接酶標抗體,不過在確定測定體系上要費不少功夫。

 

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